Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay用戶指南

摘要

本文旨在為科研人員提供Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay的詳細(xì)用戶指南。該產(chǎn)品是一種用于測(cè)量細(xì)胞中環(huán)二鳥(niǎo)苷酸（c-di-GMP）水平的均質(zhì)熒光測(cè)定試劑，具有高選擇性、高靈敏度和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)。本文將介紹產(chǎn)品的原理、特點(diǎn)、應(yīng)用場(chǎng)景、操作步驟、注意事項(xiàng)及性能參數(shù)，幫助用戶更好地理解和使用該產(chǎn)品。

關(guān)鍵詞：環(huán)二鳥(niǎo)苷酸（c-di-GMP）；均質(zhì)熒光測(cè)定；Lucerna Technologies 200-100；用戶指南

一、引言

環(huán)二鳥(niǎo)苷酸（c-di-GMP）是細(xì)菌所有的一類核酸類第二信使，參與并調(diào)節(jié)細(xì)菌多種生理功能，包括細(xì)胞分化、生物被膜的形成以及致病因子的產(chǎn)生等。因此，準(zhǔn)確測(cè)量細(xì)胞內(nèi)c-di-GMP水平對(duì)于研究細(xì)菌生理活動(dòng)及開(kāi)發(fā)新型抗菌藥物具有重要意義。Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay作為一種新型的均質(zhì)熒光測(cè)定試劑，為科研人員提供了便捷、高效的c-di-GMP檢測(cè)手段。

二、產(chǎn)品原理

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay基于熒光適體（Spinach™）技術(shù)，通過(guò)c-di-GMP與傳感器中c-di-GMP核糖開(kāi)關(guān)的初始結(jié)合，導(dǎo)致Spinach™適體的穩(wěn)定，進(jìn)而結(jié)合DFHBI-1T以產(chǎn)生熒光。熒光信號(hào)的強(qiáng)度與c-di-GMP的濃度成正比，通過(guò)測(cè)量熒光強(qiáng)度即可確定細(xì)胞內(nèi)c-di-GMP的水平。

三、產(chǎn)品特點(diǎn)

1. 高選擇性：該試劑對(duì)c-di-GMP具有高度選擇性，不受常見(jiàn)反配體的干擾。即使與過(guò)量500—1000倍的反配體（如GMP、pGpG和c-AMP-GMP）相比，也能實(shí)現(xiàn)出色的檢測(cè)性能。

2. 高靈敏度：該試劑的檢測(cè)限為50nM，具有寬廣的動(dòng)態(tài)范圍，能夠準(zhǔn)確測(cè)量低濃度的c-di-GMP。

3. 操作簡(jiǎn)便：只需將樣品與提供的檢測(cè)試劑一起孵育30分鐘，然后在帶有FITC/GFP濾光片或激發(fā)波長(zhǎng)482nm和發(fā)射波長(zhǎng)505nm的熒光讀板機(jī)上讀取樣品即可。

4. 均質(zhì)測(cè)定：無(wú)需造粒、裂解或洗滌步驟，可直接在均質(zhì)溶液中進(jìn)行測(cè)量，簡(jiǎn)化了實(shí)驗(yàn)流程。

四、應(yīng)用場(chǎng)景

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay適用于多種應(yīng)用場(chǎng)景，包括但不限于：

1. 細(xì)菌生理研究：用于研究c-di-GMP在細(xì)菌細(xì)胞分化、生物被膜形成及致病因子的產(chǎn)生等生理過(guò)程中的作用。

2. 抗菌藥物研發(fā)：通過(guò)測(cè)量抗菌藥物處理前后細(xì)菌細(xì)胞內(nèi)c-di-GMP水平的變化，評(píng)估藥物的療效及作用機(jī)制。

3. 環(huán)境監(jiān)測(cè)：用于檢測(cè)環(huán)境樣品中細(xì)菌的c-di-GMP水平，評(píng)估環(huán)境污染程度及細(xì)菌污染狀況。

五、操作步驟

1. 樣品準(zhǔn)備：收集待測(cè)細(xì)菌細(xì)胞，用適當(dāng)?shù)木彌_液懸浮細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞密度至適宜范圍。

2. 試劑添加：向樣品中加入提供的檢測(cè)試劑，包括c-di-GMP傳感器和熒光團(tuán)DFHBI-1T。

3. 孵育：將樣品與試劑混合均勻后，在37℃下孵育30分鐘。

4. 熒光測(cè)量：將孵育后的樣品轉(zhuǎn)移至熒光讀板機(jī)中，使用FITC/GFP濾光片或激發(fā)波長(zhǎng)482nm和發(fā)射波長(zhǎng)505nm進(jìn)行熒光測(cè)量。

5. 數(shù)據(jù)分析：根據(jù)熒光強(qiáng)度與c-di-GMP濃度的標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算樣品中c-di-GMP的濃度。

六、注意事項(xiàng)

1. 試劑保存：試劑應(yīng)保存在-20℃下，避免反復(fù)凍融。使用前應(yīng)將試劑平衡至室溫，并充分混勻。

2. 樣品處理：樣品處理過(guò)程中應(yīng)避免污染，確保樣品的純凈度。同時(shí)，應(yīng)注意樣品的細(xì)胞密度，避免過(guò)高或過(guò)低的細(xì)胞密度影響測(cè)量結(jié)果。

3. 儀器校準(zhǔn)：在使用熒光讀板機(jī)進(jìn)行測(cè)量前，應(yīng)對(duì)儀器進(jìn)行校準(zhǔn)，確保測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確性。

4. 實(shí)驗(yàn)重復(fù)性：為了提高實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性，建議進(jìn)行多次重復(fù)實(shí)驗(yàn)，并取平均值作為最終結(jié)果。

七、性能參數(shù)

1. 檢測(cè)限：50nM

2. 線性范圍：0.5—400nM

3. 靈敏度：比適配體（500pM）的靈敏度高約1個(gè)數(shù)量級(jí)

4. 特異性：對(duì)c-di-GMP具有高度選擇性，不受常見(jiàn)反配體的干擾

5. 動(dòng)態(tài)范圍：寬廣的動(dòng)態(tài)范圍，能夠準(zhǔn)確測(cè)量不同濃度的c-di-GMP

八、結(jié)論

Lucerna Technologies 200-100 Cyclic-di-GMP Assay作為一種新型的均質(zhì)熒光測(cè)定試劑，為科研人員提供了便捷、高效的c-di-GMP檢測(cè)手段。該試劑具有高選擇性、高靈敏度和操作簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，適用于多種應(yīng)用場(chǎng)景。通過(guò)遵循本用戶指南中的操作步驟和注意事項(xiàng)，科研人員可以準(zhǔn)確測(cè)量細(xì)胞內(nèi)c-di-GMP水平，為細(xì)菌生理研究及抗菌藥物研發(fā)提供有力支持。